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过硫酸氢钾对水产动物病原菌的敏感性研究
浏览次数:日期:2017/1/24 0:43:03
  文/西南大学(荣昌校区)鱼类繁殖与健康养殖中心

  中国水产频道独家报道,过硫酸氢钾复合盐虽然在水产上应用很久,但针对相关细菌缺少对应数据。2016年,连云港永荣生物科技有限公司委托相关院校做出两篇相应数据,希望对同行及相关养殖户有所借鉴

  摘要:不同浓度条件下,试验了过硫酸氢钾对5种水产动物常见病原菌,包括柱状曲挠杆菌、荧光假单胞菌、嗜水气单胞菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌的药物敏感性。结果表明:过硫酸氢钾对这几种病原菌的MIC为3.1——5.7mg/L之间,MBC为4.5——8.3mg/L之间。

  1材料与方法

  1.1材料

  1.1.1菌种

  试验菌株选择水产养殖鱼类的常见致病菌,试验菌株取自农业部渔业动植物病原库。

  G4柱状曲挠杆菌Flexibactercalumnaris

  56-12-10荧光假单胞菌Pseudomonasfluorescens

  ST78-3-3嗜水气单胞菌A.hydrophilahydrophila

  58-20-9副溶血弧菌Vibrioparahemolyticus

  BYK00056-11-24溶藻弧菌Vibrioalginolyticus

  1.1.2试验药品

  试验药品"过硫酸氢钾"本试验所使用的过硫酸氢钾由连云港永荣生物科技有限公司提供,具体产品信息见表1。


  1.1.3培养基

  选用肉汁胨培养基:蛋白胨10g,牛肉膏5g,NaCl5g,H2O1000mL,pH7.2——7.4,1.05kp灭菌20min。

  1.2方法

  1.2.1菌悬液的制备

  将各菌株接种到已灭菌的培养基上,培养24——48h后刮取菌苔,置于无菌生理盐水中摇匀,离心2次(4500r/min,每次20min),收集沉淀,重悬于无菌生理盐水中,参照麦氏比浊管将菌液稀释到约107CFU/mL。

  1.2.2药液配制

  过硫酸氢钾用无菌水稀释1000mg/L备用。

  1.2.3抗菌效果试验

  1.2.3.1药物敏感性试验

  药敏试验采用滤纸片法,根据抑菌圈的大小,来判断菌种对药物的敏感性,是敏感,中度敏感还是耐药。干燥纸片的制备方法:选用吸水力强而且质地均匀的滤纸,用打洞机制成6mm直径的圆纸片,120℃干燥灭菌2小时。然后把配制好的各种适宜浓度的药液,每100张纸片加入1.0mL药液,使它均匀浸润,放在无菌平皿中,37℃使它干燥,分装小瓶中并封口,4℃保存。采用平板扩散法将培养的试验菌株以无菌水制成约106CFU/mL的菌悬液,移取100μL菌悬液至肉汁胨固体培养基上,推样器推匀,稍干后镊取无菌圆纸片贴放于接种过试验菌株的平皿培养基表面,使每片含100μg的药物,28℃恒温培养24h后,游标卡尺测量抑菌圈直径(郑钧镛等,1989),见表2。

  1.2.3.2最小抑菌浓度(MIC)测定试验

  使用试管稀释法。吸取预先配制好的药物母液1mL,加入灭菌试管中,加无菌水至9mL,每一试管再移取菌悬液1mL(预先培养18h,浓度约为107cfu/mL),混匀,28℃恒温培养,24h后每管移取1mL至9mL无菌肉汁胨液体培养基内培养,肉眼观察,含最小量尚呈明显不混浊的试管所含药物的浓度为最小抑菌浓度(MIC),见表3,4。

  1.2.3.3最小杀菌浓度(MBC)测定试验

  按液体培养基稀释法的操作方法测了药物的MIC,然后把未长出菌的各个试管培养液分别移种到无菌平板上,培养后凡是平板上无菌生长的药物最低浓度就是最小杀菌浓度(MBC),见表4。

  2结果

  2.1过硫酸氢钾对不同病原菌的敏感性

  表1 不同细菌对过硫酸氢钾的敏感性

  注:S——敏感;R——不敏感。

  2.2对几株细菌的最小抑菌浓度(MIC)试验

  过硫酸氢钾对5株细菌的抑菌试验结果。“+/-”表示,2个平行组中1个为“+”、1个为“-”;“+”或“-”表示,2个平行组的结果相同,同为“+”或“-”,“+”表示有细菌生长,而“-”表示无细菌生长。每种病原菌的每个浓度梯度均设1个不加药物的阴性对照,以便于区别浑浊是由细菌繁殖造成还是药物本身产生的浑浊,抑或细菌由于其它原因造成了死亡(表2)。


  2.3对几株细菌的最小抑菌浓度(MBC)试验

  过硫酸氢钾对柱状曲挠杆菌等的MBC值见表4。

  

  3结论

  过硫酸氢钾对水产动物常见病原菌有较强的抗菌力,过硫酸氢钾对试验的5种病原菌的MIC为3.1——5.7mg/L之间,MBC为4.5——8.3mg/L之间。

  此试验数据表明连云港永荣生物科技有限公司的50%片剂及粉剂在抑菌圈及最小杀菌、抑菌浓度上都表现了极好的效果,这也表明了复合过硫酸氢钾配方的重要性。

  如有相关问题,可咨询连云港永荣生物科技有限公司赵经理15821078956。




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