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过硫酸氢钾对水产动物病原菌的敏感性研究

浏览次数：日期：2017/1/24 0:43:03

　　文/西南大学（荣昌校区）鱼类繁殖与健康养殖中心

　　中国水产频道独家报道，过硫酸氢钾复合盐虽然在水产上应用很久，但针对相关细菌缺少对应数据。2016年，连云港永荣生物科技有限公司委托相关院校做出两篇相应数据，希望对同行及相关养殖户有所借鉴

　　摘要：不同浓度条件下，试验了过硫酸氢钾对5种水产动物常见病原菌，包括柱状曲挠杆菌、荧光假单胞菌、嗜水气单胞菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌的药物敏感性。结果表明：过硫酸氢钾对这几种病原菌的MIC为3.1——5.7mg/L之间，MBC为4.5——8.3mg/L之间。

　　1材料与方法

　　1.1材料

　　1.1.1菌种

　　试验菌株选择水产养殖鱼类的常见致病菌，试验菌株取自农业部渔业动植物病原库。

　　G4柱状曲挠杆菌Flexibactercalumnaris

　　56-12-10荧光假单胞菌Pseudomonasfluorescens

　　ST78-3-3嗜水气单胞菌A.hydrophilahydrophila

　　58-20-9副溶血弧菌Vibrioparahemolyticus

　　BYK00056-11-24溶藻弧菌Vibrioalginolyticus

　　1.1.2试验药品

　　试验药品＂过硫酸氢钾＂本试验所使用的过硫酸氢钾由连云港永荣生物科技有限公司提供，具体产品信息见表1。

　　1.1.3培养基

　　选用肉汁胨培养基：蛋白胨10g，牛肉膏5g，NaCl5g，H2O1000mL，pH7.2——7.4，1.05kp灭菌20min。

　　1.2方法

　　1.2.1菌悬液的制备

　　将各菌株接种到已灭菌的培养基上，培养24——48h后刮取菌苔，置于无菌生理盐水中摇匀，离心2次(4500r／min，每次20min)，收集沉淀，重悬于无菌生理盐水中，参照麦氏比浊管将菌液稀释到约107CFU／mL。

　　1.2.2药液配制

　　过硫酸氢钾用无菌水稀释1000mg/L备用。

　　1.2.3抗菌效果试验

　　1.2.3.1药物敏感性试验

　　药敏试验采用滤纸片法，根据抑菌圈的大小，来判断菌种对药物的敏感性，是敏感，中度敏感还是耐药。干燥纸片的制备方法：选用吸水力强而且质地均匀的滤纸，用打洞机制成6mm直径的圆纸片，120℃干燥灭菌2小时。然后把配制好的各种适宜浓度的药液，每100张纸片加入1.0mL药液，使它均匀浸润，放在无菌平皿中，37℃使它干燥，分装小瓶中并封口，4℃保存。采用平板扩散法将培养的试验菌株以无菌水制成约106CFU／mL的菌悬液，移取100μL菌悬液至肉汁胨固体培养基上，推样器推匀，稍干后镊取无菌圆纸片贴放于接种过试验菌株的平皿培养基表面，使每片含100μg的药物，28℃恒温培养24h后，游标卡尺测量抑菌圈直径(郑钧镛等，1989)，见表2。

　　1.2.3.2最小抑菌浓度(MIC)测定试验

　　使用试管稀释法。吸取预先配制好的药物母液1mL，加入灭菌试管中，加无菌水至9mL，每一试管再移取菌悬液1mL(预先培养18h，浓度约为107cfu／mL)，混匀，28℃恒温培养，24h后每管移取1mL至9mL无菌肉汁胨液体培养基内培养，肉眼观察，含最小量尚呈明显不混浊的试管所含药物的浓度为最小抑菌浓度(MIC)，见表3，4。

　　1.2.3.3最小杀菌浓度(MBC)测定试验

　　按液体培养基稀释法的操作方法测了药物的MIC，然后把未长出菌的各个试管培养液分别移种到无菌平板上，培养后凡是平板上无菌生长的药物最低浓度就是最小杀菌浓度（MBC），见表4。

　　2结果

　　2.1过硫酸氢钾对不同病原菌的敏感性

　　表1 不同细菌对过硫酸氢钾的敏感性

　　注：S——敏感；R——不敏感。

　　2.2对几株细菌的最小抑菌浓度（MIC）试验

　　过硫酸氢钾对5株细菌的抑菌试验结果。“+/-”表示，2个平行组中1个为“+”、1个为“-”；“+”或“-”表示，2个平行组的结果相同，同为“+”或“-”，“+”表示有细菌生长，而“-”表示无细菌生长。每种病原菌的每个浓度梯度均设1个不加药物的阴性对照，以便于区别浑浊是由细菌繁殖造成还是药物本身产生的浑浊，抑或细菌由于其它原因造成了死亡（表2）。